Assassin's Creed: Brotherhood — ein Action-Adventure-Spiel aus der Third-Person-Perspektive. Die Hauptmerkmale des lokalen Gameplays sind Parkour, "Schleich dich in die Menge", lautlose Tötungen und beeindruckende Nahkämpfe. Das Kampfsystem wurde im Vergleich zu den vorherigen Teilen etwas verbessert, zudem wurde zum ersten Mal in der Serie ein Mehrspielermodus integriert.
Die Handlung des Spiels spielt in der Ewigen Stadt (Rom), die während der Herrschaft des Borgia-Clans in Ruinen verwandelt wurde, als die Templer das Land ausplünderten und den gesamten Reichtum um den Vatikan konzentrierten. Du musst alle Borgia-Türme zerstören, um Rom vom Einfluss seiner Familie zu befreien. Das Abschluss dieser Mission eröffnet neue Möglichkeiten für den Spieler.
Rom ist die größte Stadt in der Geschichte der Assassin’s Creed-Serie. Es ist in fünf Bereiche unterteilt: Vatikan, Stadtzentrum, Tiber, Altstadt und Vororte. Im Gegensatz zu den vorherigen Spielen ist es nicht erforderlich, von Stadt zu Stadt zu reisen, da das gesamte Spielgeschehen in einer Stadt stattfindet. Stattdessen ermöglicht das städtische Tunnelsystem dem Spieler, sich relativ leicht durch verschiedene Sektoren der Stadt zu bewegen. Spieler können ganz Rom erkunden sowie einen Teil von Navarra (Spanien) und Monteriggioni besichtigen.
In Brotherhood führten die Entwickler auch ein neues Managementsystem ein: Nun kann der Spieler selbst neue Rekruten einstellen, um einen der 15 Borgia-Türme zu zerstören, die sich rund um Rom befinden. Das Hauptziel ist es, die Einwohner der Stadt von den sie terrorisierenden Wachen zu befreien. Angestellte Teammitglieder kann der Spieler auf Missionen in Europa schicken oder sie während der Missionen um Hilfe bitten. Indem sie Missionen ausführen, sammeln die Assassinen Erfahrung. Der Spieler kann auch deren Aussehen, Fähigkeiten und Waffentechnik ändern, indem er dafür in Kämpfen verdiente Punkte ausgibt.
In Brotherhood kannst du dich auch den Erfindungen widmen. Zum Beispiel kannst du den Fallschirm von Leonardo da Vinci erstellen, den du für Sprünge von hohen Gebäuden verwenden kannst. Oder vergiftete Pfeile, einen Bogen, ein schnell wirkendes Gift erfinden oder Charaktere trainieren, damit sie schwerere Waffen halten und werfen können.