Assassin's Creed: Brotherhood — üçüncü şahıs macera oyunu. Yerel oyun deneyiminin ana özellikleri — parkur, kalabalık içinde saklanma, sessiz suikastler ve etkileyici yakın dövüş çatışmalarıdır. Savaş sistemi önceki bölümlere göre biraz geliştirilmiştir, ayrıca seride ilk kez çok oyunculu bir mod oyuna dahil edilmiştir.
Oyunun hikayesi, Tapınak Şövalyeleri'nin ülkeyi soyarak Vatikan çevresinde tüm zenginlikleri topladığı Borgiya klanının hüküm sürdüğü bir dönemde harabe haline gelen Sonsuz Şehir (Roma)'da geçmektedir. Borgiya kulelerini yok etmelisiniz ki, şehrin ailesinin etkisinden kurtulması sağlansın. Bu görevi tamamlamak, oyuncuya yeni fırsatlar sunar.
Roma, Assassin's Creed serisinin tarihindeki en büyük şehirdir. Beş bölgeye ayrılmıştır: Vatikan, şehir merkezi, Tiber, Eski Şehir ve banliyöler. Önceki oyunlardan farklı olarak, şehirden şehire seyahat etmek gerekmez, çünkü tüm oyun tek bir şehirde geçmektedir. Bunun yerine, şehirdeki tünel sistemi, oyuncunun şehrin farklı sektörleri arasında oldukça kolay hareket etmesine olanak tanır. Oyuncular bütün Roma'yı keşfedebilir ve ayrıca Navarra (İspanya) ve Monteriggioni'nin bir kısmını görebilirler.
Brotherhood'da geliştiriciler ayrıca yeni bir yönetim sistemi sunmuştur: artık oyuncu, Roma çevresinde bulunan 15 Borgiya kulesinden birini yok etmek için yeni askerler işe alabilir. Ana görev, şehir sakinlerini kendilerini terörize eden bekçilerden kurtarmaktır. Kiralanan ekip üyeleri, oyuncu tarafından Avrupa'daki görevlere gönderilebilir veya görevler sırasında yardım çağrılabilir. Görevleri tamamlayarak, suikastçiler deneyim kazanır. Oyuncu ayrıca, onları dövüşlerden kazandıkları puanları harcayarak, görünüşlerini, becerilerini ve silah kullanma yeteneklerini değiştirebilir.
Ayrıca Brotherhood'da icatlara da kendinizi adamalısınız. Örneğin, yüksek binalardan atlamak için kullanılabilecek Leonardo da Vinci'nin paraşütünü yaratabilirsiniz. Ya da zehirli oklar, yay, hızlı etki eden zehir icat edebilir ya da karakterleri daha ağır silahları tutup fırlatabilmeleri için eğitebilirsiniz.