Assassin's Creed: Brotherhood — пригодницька гра від третьої особи. Основні особливості місцевого геймплею — паркур, «приховання» в натовпі, безшумні вбивства та ефектні рукопашні бої. Бойова система була дещо покращена в порівнянні з попередніми частинами, плюс вперше в серії до гри було включено багатокористувацький режим.
Сюжет гри розгортається в Вічному місті (Римі), що перетворилося на руїни під час правління клану Борджії, коли тамплієри грабували країну, зосередивши все багатство навколо Ватикану. Ви повинні знищити всі вежі Борджії, щоб звільнити Рим від впливу цієї родини. Завершення цієї місії відкриває нові можливості перед гравцем.
Рим — найбільше місто в історії серії Assassin’s Creed. Він поділений на п'ять районів: Ватикан, центр міста, Тибр, Старе місто та передмістя. На відміну від попередніх ігор подорожувати з міста в місто не потрібно, оскільки вся дія гри відбувається в одному місті. Замість цього міська тунельна система дозволяє гравцеві досить легко переміщатися між різними районами міста. Гравці можуть досліджувати весь Рим, а також відвідати частину Наварри (Іспанія) та Монтериггоні.
У Brotherhood розробники представили також нову систему управління: тепер гравець може сам наймати нових рекрутів для знищення однієї з 15 веж Борджії, розташованих навколо Риму. Головне завдання — врятувати мешканців міста від тероризуючих їх стражників. Найнятих членів команди гравець може відправляти на завдання по Європі або закликати їх на допомогу під час місій. Виконуючи завдання, ассасини набирають досвід. Гравець також може змінювати їм зовнішність, навички та вміння володіти зброєю, витрачаючи на це отримані в боях очки.
Також у Brotherhood ви можете присвятити себе винаходам. Наприклад, створити парашут Леонардо да Вінчі, який можна буде використовувати для стрибків з висотних будівель. Або винайти отруєні стріли, лук, швидкодіючу отруту, або натренувати персонажів, щоб вони змогли утримувати й кидати важчу зброю.