Assassin's Creed: Brotherhood — un joc de aventură de acțiune din perspectivă third-person. Principalele caracteristici ale gameplay-ului local includ parcuri, „ascunzători” în mulțime, asasinate silențioase și confruntări spectaculoase la mână liberă. Sistemul de luptă a fost îmbunătățit față de versiunile anterioare, iar pentru prima dată în serie a fost inclus un mod multiplayer.
Povestea jocului se desfășoară în Orașul Etern (Roma), care a devenit ruină în timpul domniei clanului Borgia, când templierii au jefuit țara, concentrând toate bogățiile în jurul Vaticanului. Trebuie să distrugi toate turnurile Borgia pentru a elibera Roma de influența familiei lor. Finalizarea acestei misiuni deschide noi oportunități pentru jucător.
Roma este cel mai mare oraș din istoria seriei Assassin’s Creed. Este împărțit în cinci zone: Vaticanul, centrul orașului, Tibrul, orașul vechi și suburbii. Spre deosebire de jocurile anterioare, nu este necesar să călătorești din oraș în oraș, deoarece întreaga acțiune a jocului se desfășoară într-un singur oraș. În schimb, sistemul de tuneluri urbane permite jucătorului să se deplaseze destul de ușor între diferitele sectoare ale orașului. Jucătorii pot explora întreaga Roma, precum și o parte din Navarra (Spania) și Monteriggioni.
În Brotherhood, dezvoltatorii au introdus, de asemenea, un nou sistem de gestionare: acum jucătorul poate angaja noi recruți pentru a distruge unul dintre cele 15 turnuri Borgia situate în jurul Romei. Sarcina principală este să salvezi locuitorii orașului de gardienii care îi terorizează. Membrii echipei angajați pot fi trimisi în misiuni în întreaga Europă sau pot fi chemați în ajutor în timpul misiunilor. Prin îndeplinirea misiunilor, asasinii acumulează experiență. De asemenea, jucătorul poate schimba aspectul lor, abilitățile și competențele în utilizarea armelor, cheltuind puncte câștigate în bătălii.
De asemenea, în Brotherhood poți să te dedici invențiilor. De exemplu, poți crea parașuta lui Leonardo da Vinci, care poate fi folosită pentru salturi de pe clădiri înalte. Sau poți inventa săgeți otrăvite, un arc, o otravă cu eliberare rapidă sau poți antrena personaje pentru a putea manevra și arunca arme mai grele.