Assassin's Creed: Brotherhood — um jogo de aventura em terceira pessoa. As principais características da jogabilidade local incluem parkour, "esconder-se" na multidão, assassinatos silenciosos e combates de mão a mão impressionantes. O sistema de combate foi um pouco aprimorado em comparação com os títulos anteriores, e pela primeira vez na série, um modo multiplayer foi incluído no jogo.
A história do jogo se desenrola na Cidade Eterna (Roma), que se transformou em ruínas durante o domínio do clã Borgia, quando os templários saqueavam o país, concentrando toda a riqueza ao redor do Vaticano. Você deve destruir todas as torres Borgia para libertar Roma da influência da sua família. Completar essa missão abre novas oportunidades para o jogador.
Roma é a maior cidade na história da série Assassin’s Creed. Ela é dividida em cinco áreas: Vaticano, centro da cidade, Tibre, Cidade Velha e subúrbios. Ao contrário dos jogos anteriores, não é necessário viajar de cidade em cidade, pois toda a ação do jogo se passa em uma única cidade. Em vez disso, o sistema de túneis urbanos permite ao jogador se mover com facilidade por diferentes setores da cidade. Os jogadores podem explorar toda Roma, além de ver uma parte de Navarra (Espanha) e Monteriggioni.
Em Brotherhood, os desenvolvedores também apresentaram um novo sistema de gerenciamento: agora o jogador pode contratar novos recrutas para destruir uma das 15 torres Borgia localizadas em Roma. O principal objetivo é salvar os habitantes da cidade dos guardas que os aterrorizam. Os membros da equipe contratados podem ser enviados em missões pela Europa ou chamados para ajudar durante as missões. Ao completar missões, os assassinos ganham experiência. O jogador também pode modificar a aparência, habilidades e a capacidade de manuseio de armas dos personagens, gastando os pontos ganhos em combate.
Além disso, em Brotherhood você pode se dedicar a invenções. Por exemplo, criar um paraquedas de Leonardo da Vinci, que pode ser usado para saltar de prédios altos. Ou inventar flechas envenenadas, um arco, veneno de ação rápida, ou treinar os personagens para que possam carregar e arremessar armas mais pesadas.